建立鐵甲草中大黃素和齊墩果酸的含量測定方法。
采用HPC法測定鐵甲草中齊墩果酸的草中含量。WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，齐墩5μm），果酸流動相為甲醇-PBS（85∶15），含定流速1.0mL/min，量测柱溫35℃，铁甲進樣量為10μL，草中檢測波長210nm，齐墩測定齊墩果酸的果酸含量。結果：齊墩果酸在5～50μg/mL的含定濃度範內呈良好線性關係（Y=4533X+909.6，R=0.9996），量测平均回收率為99.39%，铁甲RSD為1.53%（n=6）。草中
本實驗方法準確靈敏、齐墩穩定可靠，可用於鐵甲草中齊墩果酸的含量測定。
鐵甲草（CassiamimosoidesLinn.）為豆科（Leguminousae）決明屬一年或多年生亞灌木狀草本植物，以全草入藥，主要分布於廣東、福建、雲南、台灣、貴州和廣西等地，其味甘、性平，具有清肝明目、散瘀化積的功效。有研究結果表明，鐵甲草能夠有效抑製脂肪酶，防止脂肪肝；其主要化學成分有大黃素、齊墩果酸、β-穀甾醇、木犀草素、槲皮素等。然而，目前國內外對鐵甲草的研究主要集中在化學成分和藥理作用方麵，有關鐵甲草藥材質量控製的研究很少，且未見對其有效成分進行含量測定的報道。本實驗以鐵甲草中具有抗炎保肝的有效成分齊墩果酸，作為定量檢測指標成分，建立鐵甲草中齊墩果酸的HPLC含量測定方法，為鐵甲草的質量控製和合理開發提供參考依據。
WatersAlliance2695型高效液相色譜儀；WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm）；WJX-A1000型高速多功能粉碎機；JP-100S型超聲波清洗器；MING-CHE24UV超純水機。
齊墩果酸對照品（C1723001）；鐵甲草采於廣東省梅州市蕉嶺縣，經嘉應學院醫學院生藥學翟明老師鑒定為豆科決明屬植物鐵甲草（Cassiamimosoides）的全草；其他試劑均為分析純。
精密稱取齊墩果酸對照品1mg，置於10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，即得。
稱取鐵甲草粗粉2g，加入2moL/L的鹽酸10mL，充分浸潤後，在60℃水浴下，酸水解2h，濾渣用超純水水洗至中性，幹燥後加入10倍量的90%的乙醇溶液和0.5%NaOH溶液，調節pH值至8，50℃超聲30min，抽濾後，水浴加熱濃縮成浸膏。
浸膏用甲醇超聲溶解後，離心取上清液，定容至10mL，即得。
色譜柱：WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇：PBS=85∶15；檢測波長：210nm；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL，柱溫：35℃。
分別精密吸取“2.1”項下的齊墩果酸對照品0.5、1、2、3、4、5mL溶液於10mL容量瓶中，用甲醇定容，得濃度為5、10、20、30、40、50μg/mL係列濃度的齊墩果酸對照品溶液，於“2.3”項下的色譜條件，以齊墩果酸對照品溶液色譜峰麵積Y為縱坐標，齊墩果酸對照品濃度X（μg/mL）為橫坐標，進行線性擬合，得齊墩果酸標準曲線，求得回歸方程Y=4533X+909.6，R=0.9996。結果表明，在5～50μg/mL的濃度範圍內，齊墩果酸對照品溶液的峰麵積與濃度的線性關係良好。
取項目“2.1”和“2.2”項所製備的對照品溶液和供試品溶液，在“2.3”的色譜條件下進樣，齊墩果酸的保留時間約為13.77min，峰型穩定，分離度良好，有較好的基線分離，未見雜質峰幹擾，具有良好的專屬性。如圖1所示。
精密吸取對照品溶液1.0mL，於“2.3”項的色譜條件下，連續重複進樣6次，每次10μL，檢測得到大黃素峰麵積的RSD為1.36%，表明儀器精密度良好。
精密吸取供試品溶液1.0mL，分別於0、2、4、6、8、12h於“2.3”項色譜條件下進樣，檢測得到齊墩果酸的峰麵積的RSD為0.82%。表明供試品溶液在12h內穩定。
精密稱取6份等質量鐵甲草粗粉2.00g，按“2.2”項下的方法平行製備6份供試品溶液，於“2.3”項的色譜條件，檢測得到齊墩果酸峰麵積的RSD為1.47%。表明該方法重複性良好。
精密稱取已知含量的等質量鐵甲草粗粉6份，每份2.00g，分別精密加入同一濃度的齊墩果酸對照品，按上述“2.2”的提取方法平行製備成供試品溶液，於“2.3”項色譜條件下測定，計算得到平均回收率結果為99.39%，RSD為1.53%。表明該方法測得的結果有良好準確性。結果見表1。
精密稱取3份不同批藥材各2.00g，按照“2.2”項的製備方法製備成供試品溶液，每份樣品分別在“2.3”項的色譜條件下進樣三次，記錄峰麵積，計算樣品中齊墩果酸的含量。結果見表2。
在考察齊墩果酸的色譜條件時，曾采用甲醇水，甲醇-0.1%甲酸和甲醇-PBS作為流動相，考察結果顯示，當流動相選擇為甲醇-PBS（85∶15）時，樣品中齊墩果酸分離度更好，峰型穩定，無雜峰幹擾。由於齊墩果酸同時含有羥基和羧基基團，在堿性條件下更易被提取，在提取條件的考察過程中，發現加入適量堿溶液使其pH值至8時，更利於齊墩果酸成分的提取。
本實驗建立應用高效液相色譜法測定鐵甲草中齊墩果酸含量的方法，方法精密度高、穩定性、重複性、加樣回收率均符合方法學驗證的要求。測得3批樣品中，齊墩果酸的含量在3.67%～3.73%之間，含量較高，且齊墩果酸在臨床上主要用於護肝降酶，與鐵甲草的功效相符，說明齊墩果酸適合作為鐵甲草的質量檢測指標成分，該方法可作為鐵甲草質量控製的方法，從而為鐵甲草質量標準的製訂提供參考依據。
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