目的参柏：對參柏洗劑原有定性和定量方法進行標準提高研究。方法：在原標準定性方法基礎上，洗剂增加苦參堿和氧化苦參堿、质量鹽酸小檗堿對照品鑒別及地骨皮薄層色譜鑒別；增加高效液相色譜法測定方中君藥苦參所含有效成分苦參堿和氧化苦參堿含量。标准結果：薄層色譜法定性鑒別中，提高苦參、研究苦參堿、参柏槐定堿、洗剂黃柏、质量鹽酸小檗堿、标准地骨皮斑點清晰且對應良好，提高陰性無幹擾；苦參堿和氧化苦參堿分別在0.545 μg～5.45 μg（苦參堿r=0.99988）、研究0.2226 μg～2.226 μg（氧化苦參堿r=0.99993）濃度範圍內，参柏與色譜峰麵積線性關係均良好；苦參堿平均回收率99.27%（n=9），洗剂RSD為2.11%、质量氧化苦參堿平均回收率103.07%（n=9），RSD為1.68%。結論：本研究所完善、建立的定性和定量分析方法簡便，重複性好，準確可靠，可用於參柏洗劑的質量控製。
參柏洗劑為我院多年的經驗方，主要是由苦參、黃柏、地骨皮等中藥製成的洗劑，具有清熱祛濕，殺菌止癢的功效，臨床上主要用於濕疹、癬、疥瘡及蟲咬皮疹。苦參具有清熱燥濕、殺蟲等功效，在方中為君藥，主要用治濕疹、濕瘡、皮膚瘙癢、疥癬麻風等病症，是許多外用複方製劑的重要組成藥味。苦參主要含有生物堿類、黃酮類、脂肪酸類、苯丙素類等多種成分，其中生物堿類和黃酮類是其主要藥理活性成分。生物堿主要含有苦參堿、氧化苦參堿、槐定堿等，具有抗炎鎮痛、抗菌、抗心律失常、抗腫瘤、抗病毒等多方麵藥理作用。黃柏具有清熱燥濕，解毒療瘡的功效，可用治濕疹濕瘡，瘡瘍腫毒。黃柏主含生物堿和黃酮類成分，其中生物堿類成分含量最高，是其主要有效成分，以鹽酸小檗堿含量最高。黃柏在皮膚科疾病治療方麵應用廣泛，有抗炎抗菌、抗過敏和抗氧化、抗痛風等作用，在方中為君藥。地骨皮在方中為臣藥，主含生物堿、有機酸及其酯類、蒽醌類等化合物，藥理研究表明其具有降血壓、降血糖、降血脂、抑菌抗炎等作。參柏洗劑現行標準鑒別項中隻用了苦參、黃柏對照藥材鑒別，無含量測定項，缺乏定量控製指標。為提升和完善該製劑質量標準，確保臨床用藥的安全、穩定，本研究擬采用薄層色譜法增加苦參堿、槐定堿、鹽酸小檗堿的對照品鑒別和臣藥地骨皮的對照藥材鑒別；增加主要藥理活性成分苦參堿和氧化苦參堿含量測定方法。
1實驗器材
1.1儀器
澳華HH-2恒溫水浴鍋（常州金壇良友儀器有限公司）；RE-52AA型旋轉蒸發儀（上海科興儀器有限公司）；卡瑪ATS4自動點樣器（瑞士CAMAG公司）；卡瑪TLC成像係統（瑞士CAMAG公司）；雙傑JJ500電子天平（常熟市雙傑測試儀器廠）；TLE-204梅特勒托利多分析天平（瑞士梅特勒托利多公司）；安捷倫高效液相色譜儀（型號：1260/1200，美國安捷倫公司）。
1.2材料
苦參對照藥材（121019-201407）、苦參堿（110805-200306）、氧化苦參堿（110780-201007，以92.3%計）、槐定堿（110784-201706）、黃柏對照藥材（121510-201606）、鹽酸小檗堿（110713-201613）、地骨皮對照藥材（121087-201707），均購買自中國食品藥品檢定研究院。參柏洗劑（250 mL/瓶，批號分別為20190102、20191103、20200501），均由廣東省第二中醫院藥劑科製劑室生產提供。乙腈、乙醇為Merck色譜純試劑，液相用水為屈臣氏飲用水，三氯甲烷、濃氨試液、甲醇等其他試劑為分析純。
2 TLC法定性鑒別
2.1苦參定性鑒別
取參柏洗劑20 mL，加濃氨試液調節溶液呈堿性後，用三氯甲烷振搖提取2次，30 mL/次，合並兩次三氯甲烷提取液，回收溶劑至幹，殘渣加1 mL三氯甲烷溶解，製得供試品溶液；另外取苦參對照藥材1.00 g，加水100 mL，煮沸並保持微沸30分鍾，煎液濃縮至約20 mL，自“加濃氨試液調節溶液呈堿性後”起，同法製成苦參對照藥材溶液；再取苦參堿、槐定堿對照品適量，加無水乙醇分別製成每1 mL各含0.5 mg的對照品溶液；按照參柏洗劑處方比例和工藝，製得苦參陰性樣品，再按供試品溶液製備方法操作，製得苦參陰性對照溶液。依照《中國藥典》2015版通則薄層色譜法指導原則[21]操作，吸取上述參柏洗劑供試品溶液、陰性對照溶液各5 μL、苦參對照藥材溶液10 μL、對照品溶液各10 μL，分別點樣在2%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G堿板上，使成條帶狀，配製甲苯-丙酮-甲醇體積比為（16∶6∶1）的展開劑，展開至約8 cm，取出展開後的薄層板，晾幹，再配製甲苯-甲醇-乙酸乙酯-水體積比為（4∶4∶8∶2）的溶液，在10 ℃以下放置使之分層，再取上層溶液作為展開劑，展開，將薄層板晾幹，用碘化鉍鉀試液作為顯色劑。結果顯示，參柏洗劑供試品色譜圖中，在與苦參堿對照藥材色譜和苦參堿及槐定堿對照品色譜圖對應Rf值處，斑點均對應良好，且苦參陰性無幹擾，見圖1。
2.2黃柏定性鑒別
取苦參鑒別項下供試品溶液作為黃柏鑒別供試品溶液。另取黃柏對照藥材0.10 g，加水100 mL，煮沸並保持微沸30min，煎液濃縮至約20 mL，自“2.1”項下“加濃氨試液調節溶液呈堿性後”起，同法製成黃柏對照藥材溶液；再取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇製成每1 mL含0.5 mg的對照品溶液；按照參柏洗劑處方比例和工藝，製得黃柏陰性樣品，再按供試品溶液製備方法操作，製得黃柏陰性對照溶液。依照《中國藥典》2015版通則薄層色譜法指導原則[21]操作，吸取上述參柏洗劑供試品溶液、陰性對照溶液、對照品溶液各1 μL、黃柏對照藥材溶液2 μL，分別點樣在矽膠G薄層板上，使成條帶狀，配製乙酸乙酯-冰乙酸-甲酸-水體積比為（15∶1∶1∶2）的展開劑[21]，展開並晾幹，置波長為365 nm的紫外光燈下觀察。結果顯示，參柏洗劑供試品色譜圖中，在與黃柏對照藥材和鹽酸小檗堿對照品色譜圖對應Rf值處，顯相同的亮黃色熒光斑點，且黃柏陰性無幹擾，見圖2。
2.3地骨皮定性鑒別
取苦參鑒別項下的供試品溶液作為地骨皮鑒別供試品溶液。另取地骨皮對照藥材1.00 g，加水100 mL，煮沸並保持微沸30min，煎液濃縮至約20 mL，自“2.1”項下“加濃氨試液調節溶液呈堿性後”起，同法製成地骨皮對照藥材溶液；按照參柏洗劑處方比例和工藝，製得地骨皮陰性樣品，再按供試品溶液製備方法操作，製得地骨皮陰性對照溶液。依照《中國藥典》通則薄層色譜法指導原則[21]操作，吸取上述參柏洗劑供試品溶液、陰性對照溶液、地骨皮對照藥材溶液各5 μL，分別點樣在矽膠G薄層板上，使成條帶狀，配製甲苯-丙酮-甲酸體積比為（10∶3∶0.3）的展開劑，展開並晾幹，置波長為365 nm的紫外光燈下觀察。結果顯示，參柏洗劑供試品色譜圖中，在與地骨皮對照藥材色譜圖對應Rf值處，顯相同的藍色熒光斑點，且地骨皮陰性無幹擾，見圖3。
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